郭坤元¹ , 张欣欣² , 林先明 ^1*

1 湖北省农业科学院中药材研究所, 国家中药材产业技术体系恩施综合试验站, 恩施, 445000; 2 东北林业大学, 盐碱地生物资源环境研究中心,东北盐碱植被恢复与重建教育部重点实验室, 哈尔滨, 150040
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《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18 卷, 第 17 篇   
收稿日期: 2020年01月02日    接受日期: 2020年01月09日    发表日期: 2020年05月29日

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为了筛选与拟南芥半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因 AtCYS6 相互作用的蛋白，构建其酵母双杂交诱饵表达载体。本研究利用 PCR 方法扩增得到拟南芥 AtCYS6 的基因片段，与诱饵载体 pGBKT7 连接构建诱饵表达载体，经双酶切以及测序检测验证重组载体构建成功后，通过醋酸锂法将诱饵表达载体 pGBKT7-AtCYS6 与空载体 pGBKT7 分别转化到 Y2HGold 酵母菌株，检测其是否有自激活能力以及对宿主酵母菌株是否有毒性作用。结果表明：经 PCR 扩增后得到了 AtCYS6 基因，成功构建了无自激活和没有毒性的诱饵表达载体 pGBKT7-AtCYS6。本研究结果可进一步为筛选与 AtCYS6 相互作用的蛋白质及功能研究提供科学依据。
 

拟南芥(Arabidopsis thaliana)；半胱氨酸蛋白酶抑制剂；酵母双杂交；诱饵表达载体